Tinción de Ziehl-Neelsen

La tinción de Ziehl-Neelsen , también conocida como tinción acidorresistente , es una técnica de tinción bacteriológica utilizada en citopatología y microbiología para identificar bacterias acidorresistentes bajo microscopio , en particular los miembros del género Mycobacterium . Este método de tinción fue introducido inicialmente por Paul Ehrlich (1854-1915) y posteriormente modificado por los bacteriólogos alemanes Franz Ziehl (1859-1926) y Friedrich Neelsen (1854-1898) a fines del siglo XIX.

El método de tinción acidorresistente, junto con la tinción con fenol auramina , sirve como herramienta de diagnóstico estándar y es ampliamente accesible para diagnosticar rápidamente la tuberculosis (causada por Mycobacterium tuberculosis ) y otras enfermedades causadas por micobacterias atípicas , como la lepra (causada por Mycobacterium leprae ) y la infección por Mycobacterium avium-intracellulare (causada por el complejo Mycobacterium avium ) en muestras como esputo , líquido de lavado gástrico y líquido de lavado broncoalveolar . Estas bacterias acidorresistentes poseen una capa externa cerosa rica en lípidos que contiene altas concentraciones de ácido micólico , lo que las hace resistentes a las técnicas de tinción convencionales como la tinción de Gram . ^{[1] [2]}

Después del procedimiento de tinción de Ziehl-Neelsen con fucsina carbol , las bacterias acidorresistentes se observan como bastoncillos de color rojo o rosa intensos sobre un fondo azul o verde, según la tinción de contraste específica utilizada, como azul de metileno o verde malaquita , respectivamente. Las bacterias no acidorresistentes y otras estructuras celulares se colorearán con la tinción de contraste, lo que permitirá una clara diferenciación. ^[3]

En muestras de patología anatómica, la inmunohistoquímica y las modificaciones de la tinción de Ziehl-Neelsen (como la tinción de Fite-Faraco) tienen una utilidad diagnóstica comparable para identificar Mycobacterium . Ambas son superiores a la tinción tradicional de Ziehl-Neelsen. ^[4]

Las micobacterias son bacilos con forma de varilla de crecimiento lento , ligeramente curvados o rectos, y se consideran grampositivos . Algunas micobacterias son saprofitas de vida libre , pero muchas son patógenos que causan enfermedades en animales y humanos. Mycobacterium bovis causa tuberculosis en el ganado. Dado que la tuberculosis se puede transmitir a los humanos, la leche se pasteuriza para matar cualquiera de las bacterias. ^[5] Mycobacterium tuberculosis que causa tuberculosis (TB) en humanos es una bacteria transmitida por el aire que generalmente infecta los pulmones humanos. ^{[6] [7]} Las pruebas de tuberculosis incluyen análisis de sangre, pruebas cutáneas y radiografías de tórax. ^[8] Cuando se observan los frotis para tuberculosis, se tiñen con una tinción acidorresistente. Estos organismos acidorresistentes como Mycobacterium contienen grandes cantidades de sustancias lipídicas dentro de sus paredes celulares llamadas ácidos micólicos. Estos ácidos resisten la tinción con métodos ordinarios como una tinción de Gram . ^[9] También se puede utilizar para teñir algunas otras bacterias, como Nocardia . Los reactivos utilizados para la tinción de Ziehl-Neelsen son fucsina carbol , alcohol ácido y azul de metileno . Los bacilos acidorresistentes son de color rojo brillante después de la tinción. ^{[ cita requerida ]}

La tinción de Ziehl-Neelsen es un tipo de tinción de hongos de espectro estrecho. Las tinciones de hongos de espectro estrecho son selectivas y pueden ayudar a diferenciar e identificar hongos. ^[10] Los resultados de la tinción de Ziehl-Neelsen son variables porque muchas paredes celulares de hongos no son resistentes a los ácidos. ^[11] Un ejemplo de un tipo común de hongo resistente a los ácidos que generalmente se tiñe con la tinción de Ziehl-Neelsen se llama Histoplasma (HP). ^[12] El Histoplasma se encuentra en el suelo y en las heces de pájaros y murciélagos. ^[13] Los humanos pueden contraer histoplasmosis por inhalación de las esporas de hongos. El Histoplasma ingresa al cuerpo y va a los pulmones, donde las esporas se convierten en levadura. ^[14] La levadura ingresa al torrente sanguíneo y afecta los ganglios linfáticos y otras partes del cuerpo. Por lo general, las personas no se enferman por inhalar las esporas, pero si lo hacen, generalmente tienen síntomas similares a los de la gripe. ^[15] Otra variación de este método de tinción se utiliza en micología para teñir de forma diferencial las incrustaciones acidorresistentes en las hifas cuticulares de ciertas especies de hongos del género Russula . ^{[16] [17]} Algunas endosporas libres pueden confundirse con levaduras pequeñas, por lo que se utiliza la tinción para identificar los hongos desconocidos. ^[18] También es útil en la identificación de algunos protozoos, a saber, Cryptosporidium e Isospora . La tinción de Ziehl-Neelsen también puede dificultar el diagnóstico en el caso de paragonimiasis porque los huevos en la muestra de esputo para óvulos y parásitos (O&P) pueden ser disueltos por la tinción ^{[ cita requerida ]}

En 1882, Robert Koch descubrió la etiología de la tuberculosis. ^[19] Poco después del descubrimiento de Koch, Paul Ehrlich desarrolló una tinción para Mycobacterium tuberculosis, llamada tinción de hematoxilina de alumbre. ^{[20] Franz Ziehl alteró la técnica de tinción de Ehrlich utilizando ácido carbólico como mordiente. Friedrich Neelsen mantuvo la elección de mordiente de Ziehl, pero cambió la tinción primaria a carbolfucsina. Las modificaciones de Ziehl y Neelsen juntas han desarrollado la tinción de Ziehl-Neelsen.} Joseph Kinyoun desarrolló otra tinción acidorresistente utilizando la técnica de tinción de Ziehl-Neelsen, pero eliminando el paso de calentamiento del procedimiento. Esta nueva tinción de Kinyoun se denominó tinción de Kinyoun. ^{[ cita requerida ]}

Un procedimiento típico de tinción de AFB implica dejar caer las células en suspensión sobre un portaobjetos, luego secar al aire el líquido y fijar las células con calor. ^[21]

Los estudios han demostrado que una tinción de AFB sin cultivo tiene un valor predictivo negativo bajo. Se debe realizar un cultivo de AFB junto con una tinción de AFB; esto tiene un valor predictivo negativo mucho más alto. ^{[ cita requerida ]}

El mecanismo de acción de la tinción de Ziehl-Neelsen no se entiende completamente, pero se cree que implica una reacción química entre los colorantes ácidos y las paredes celulares de las bacterias . La acidez de los colorantes hace que se unan con más fuerza a las paredes celulares de las bacterias que a otras células o tejidos . Esto da como resultado la tinción selectiva solo de aquellas células que tienen una alta densidad de material de pared celular, como las bacterias acidorresistentes. ^[26]

La tinción de Ziehl-Neelsen es un proceso de tinción de dos pasos . En el primer paso, el tejido se tiñe con una solución de fucsina básica, que tiñe todas las células de rosa. En el segundo paso, el tejido se incuba en una solución de alcohol ácido, que decolora todas las células excepto las células acidorresistentes, que retienen el color y aparecen de color rojo. Los mecanismos por los que se produce este color no se comprenden bien, pero se cree que la interacción de la fucsina básica con los componentes de la pared celular de las bacterias crea una nueva molécula que es responsable del color. ^[27]

• Alcohol de ácido sulfúrico al 1% para actinomicetos , nocardia .
• Alcohol sulfúrico al 0,5–1% para ooquistes de isospora y cyclospora .
• Alcohol sulfúrico al 0,25–0,5% para endosporas bacterianas.
• Tinción diferencial : se utiliza ácido acético glacial, sin aplicar calor, la tinción secundaria es azul de metileno de Loeffler.
• También está disponible la modificación de Kinyoun (o técnica de Ziehl-Neelsen fría).
• Un protocolo en el que se sustituye un detergente por el fenol altamente tóxico en la solución de tinción de fucsina. ^[28]

• Medio Lowenstein-Jensen
• Tinción de Gram
• Tinción de Kinyoun
• Resistencia a los ácidos
• Franz Ziehl
• Friedrich Neelsen

• "Microbiología con enfermedades por sistema corporal", Robert W. Bauman, 2009, Pearson Education, Inc.

• Medios relacionados con la tinción de Ziehl-Neelsen en Wikimedia Commons
• Protocolo Ziehl–Neelsen ( formato PDF ).