Nitrocefina
Compuesto químico
Nitrocefina
Identificadores
  • Ácido (6 R ,7 R )-3-[( E )-2-(2,4-dinitrofenil)etenil]-
    8-oxo-7-[(2-tiofen-2-ilacetil)amino]-
    5-tia-1-azabiciclo[4.2.0]oct-2-eno-
    2-carboxílico
Número CAS
  • 41906-86-9 controlarY
Identificador de centro de PubChem
  • 6436140
Araña química
  • 4940809 controlarY
UNIVERSIDAD
  • EWP54G0J8F
Química biológica
  • ChEMBL480517
Panel de control CompTox ( EPA )
  • DTXSID401318525
Tarjeta informativa de la ECHA100.164.734
Datos químicos y físicos
FórmulaC21H16N4O8S2​​​​​​​​​
Masa molar516,50  g·mol −1
Modelo 3D ( JSmol )
  • Imagen interactiva
  • O=C(Cc1cccs1)N[C@@H]1C(=O)N2C(C(=O)O)=C(/C=C/c3ccc([N+](=O)[O-])cc3[N+](=O)[O-])CS[C@H]12
  • InChI=1S/C21H16N4O8S2/c26-16(9-14-2-1-7-34-14)22-17-19(27)23-18(21(28)29)12(10-35-20( 17)23)4-3-11-5-6-13(24(30)31)8-15(11)25(32)33/h1-8,17,20H,9-10H2,(H,22 ,26)(H,28,29)/b4-3+/t17-,20-/m1/s1 controlarY
  • Clave:LHNIIDJCEODSHA-OQRUQETBSA-N controlarY
  (verificar)


La nitrocefina es un sustrato cromogénico de cefalosporina que se utiliza rutinariamente para detectar la presencia de enzimas beta-lactamasas producidas por varios microbios. La resistencia mediada por beta-lactamasas a antibióticos beta-lactámicos como la penicilina es un mecanismo de resistencia generalizado para una serie de bacterias, incluidas las de la familia Enterobacteriaceae , un grupo importante de bacterias entéricas Gram-negativas . Existen otros métodos para la detección de beta-lactamasas , incluida la PCR ; sin embargo, la nitrocefina permite una detección rápida de beta-lactamasas utilizando pocos materiales y equipo económico. [1] [2]

Estructura

Como cefalosporina , la nitrocefina contiene un anillo de beta-lactama que es susceptible a la hidrólisis mediada por la beta-lactamasa . Una vez hidrolizado, el compuesto de nitrocefina degradado cambia rápidamente de color de amarillo a rojo. Aunque la nitrocefina se considera una cefalosporina , no parece tener propiedades antimicrobianas. [1]

Degradación y propiedades cromogénicas

Los antibióticos beta-lactámicos intactos actúan uniéndose a las proteínas de unión a la penicilina (PBP) implicadas en la síntesis de peptidoglicano . Las betalactamasas hidrolizan el enlace amida entre el carbono carbonilo y el nitrógeno en el anillo beta-lactámico de betalactámicos susceptibles y miembros de subclases de betalactámicos (incluidas ciertas cefalosporinas). Después de la hidrólisis del enlace amida, el antibiótico carece de la capacidad de unirse a las PBP bacterianas y se vuelve inútil. La detección visual de este proceso es esencialmente imposible con la mayoría de las cefalosporinas porque el cambio de absorción ultravioleta del producto intacto frente al hidrolizado ocurre fuera del espectro visible . Sin embargo, la hidrólisis de la nitrocefina produce un cambio de absorción ultravioleta dentro del espectro de luz visible desde la nitrocefina intacta (amarilla) (~380 nm) a la nitrocefina degradada (roja) (~500 nm), lo que permite la detección visual de la actividad de la betalactamasa a nivel macroscópico. [1]

Ensayos de detección

Los siguientes ensayos describen métodos en los que se puede utilizar nitrocefina para detectar enzimas betalactamasas utilizando materiales y equipos económicos. [3] Las soluciones de trabajo de nitrocefina se encuentran entre 0,5 mg/ml y 1,0 mg/ml.

Ensayo de superficie de portaobjetos

  1. Agregue una gota de 0,5 mg/ml de nitrocefina a la superficie de un portaobjetos de vidrio limpio.
  2. Seleccione una colonia de una superficie de agar utilizando un asa estéril y mézclela con la gota.
  3. La aparición de color rojo dentro de 20-30 minutos indica actividad de betalactamasa .

Ensayo de contacto directo

  1. Coloque una gota de 0,5 mg/ml de Nitrocefina directamente sobre la superficie de una colonia aislada .
  2. La aparición de color rojo dentro de 20-30 minutos indica actividad de betalactamasa .

Ensayo de suspensión en caldo

  1. Añadir 3-5 gotas de 0,5 mg/ml de nitrocefina a 1 ml de suspensión de caldo.
  2. La aparición de color rojo dentro de 20-30 minutos indica actividad de betalactamasa .

Ensayo de células lisadas

  1. Lise 1 ml de suspensión celular mediante sonicación.
  2. Añadir 3-5 gotas de 0,5 mg/ml de nitrocefina a la suspensión de células lisadas.
  3. La aparición de color rojo dentro de 20-30 minutos indica actividad de betalactamasa .

Ensayo con papel de filtro

  1. Coloque un trozo pequeño de papel de filtro (~3 x 3 cm) en una placa de Petri limpia u otra superficie aislada limpia y sature (3-5 ml) con 0,5 mg/ml de nitrocefina.
  2. Seleccionar una colonia aislada y extenderla sobre la superficie del papel de filtro impregnado.
  3. La aparición de color rojo en 20-30 minutos indica actividad de beta-lactamasa .

[4]

Véase también

Referencias

  1. ^ abc O'Callaghan CH, Morris A, Kirby SM, Shingler AH (abril de 1972). "Nuevo método para la detección de beta-lactamasas mediante el uso de un sustrato cromogénico de cefalosporina". Agentes antimicrobianos y quimioterapia . 1 (4): 283–8. doi :10.1128/AAC.1.4.283. PMC  444209 . PMID  4208895.
  2. ^ Coudron PE, Moland ES, Sanders CC (octubre de 1997). "Presencia y detección de betalactamasas de espectro extendido en miembros de la familia Enterobacteriaceae en un centro médico para veteranos: busque y encontrará". Journal of Clinical Microbiology . 35 (10): 2593–7. doi :10.1128/jcm.35.10.2593-2597.1997. PMC 230016 . PMID  9316913. 
  3. ^ Parr TR, Pai CH, Bryan LE (julio de 1984). "Método de detección simple para aislamientos de Haemophilus influenzae resistentes a la ampicilina positivos y negativos a la beta-lactamasa". Journal of Clinical Microbiology . 20 (1): 131–2. doi :10.1128/jcm.20.1.131-132.1984. PMC 271264 . PMID  6378964. 
  4. ^ "Protocolo de nitrocefina" (PDF) . TOKU-E.com . Archivado desde el original (PDF) el 17 de abril de 2016.
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