Isopropil β-D-1-tiogalactopiranósido
Isopropil β-d-1-tiogalactopiranósido
Nombres
Nombre IUPAC
Propan-2-il 1-tio-β- D -galactopiranósido
Nombre sistemático de la IUPAC
(2R , 3R , 4S , 5R , 6S ) -2-(Hidroximetil)-6-[(propan-2-il)sulfanil]oxano-3,4,5-triol
Identificadores
  • 367-93-1 controlarY
Modelo 3D ( JSmol )
  • Imagen interactiva
Araña química
  • 571154
Tarjeta informativa de la ECHA100.006.094
MallaIsopropilo + tiogalactosido
Identificador de centro de PubChem
  • 656894
UNIVERSIDAD
  • X73VV2246B controlarY
  • DTXSID6041052
  • InChI=1S/C9H18O5S/c1-4(2)15-9-8(13)7(12)6(11)5(3-10)14-9/h4-13H,3H2,1-2H3/t5- ,6+,7+,8-,9+/m1/s1
    Clave: BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N
  • InChI=1/C9H18O5S/c1-4(2)15-9-8(13)7(12)6(11)5(3-10)14-9/h4-13H,3H2,1-2H3/t5- ,6+,7+,8-,9+/m1/s1
    Clave: BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXBD
  • CC(C)S[C@H]1[C@@H]([C@H]([C@H]([C@H](O1)CO)O)O)O
Propiedades
C9H18O5S​​​​​​
Masa molar238,30  g·mol −1
Salvo que se indique lo contrario, los datos se proporcionan para los materiales en su estado estándar (a 25 °C [77 °F], 100 kPa).
Compuesto químico

El isopropil β- d -1-tiogalactopiranósido ( IPTG ) es un reactivo de biología molecular . Este compuesto es un imitador molecular de la alolactosa , un metabolito de la lactosa que desencadena la transcripción del operón lac , y por lo tanto se utiliza para inducir la expresión de proteínas donde el gen está bajo el control del operador lac .

Mecanismo de acción

Al igual que la alolactosa, el IPTG se une al represor lac y libera el represor tetramérico del operador lac de manera alostérica , lo que permite la transcripción de genes en el operón lac, como el gen que codifica la beta-galactosidasa , una enzima hidrolasa que cataliza la hidrólisis de los β-galactósidos en monosacáridos. Pero a diferencia de la alolactosa, el átomo de azufre ( S ) crea un enlace químico que no es hidrolizable por la célula, lo que evita que la célula metabolice o degrade el inductor . Por lo tanto, su concentración permanece constante durante un experimento.

La captación de IPTG por E. coli puede ser independiente de la acción de la permeasa de lactosa , ya que también intervienen otras vías de transporte. [1] En concentraciones bajas, el IPTG entra en las células a través de la permeasa de lactosa, pero en concentraciones altas (normalmente utilizadas para la inducción de proteínas), el IPTG puede entrar en las células independientemente de la permeasa de lactosa. [2]

Uso en laboratorio

Cuando se almacena en forma de polvo a 4 °C o menos, el IPTG es estable durante 5 años. Es significativamente menos estable en solución; Sigma recomienda almacenarlo durante no más de un mes a temperatura ambiente. [3] El IPTG es un inductor eficaz de la expresión de proteínas en el rango de concentración de 100 μmol/L a 3,0 mmol/L. Normalmente, se añade una solución estéril filtrada de 1 mol/L de IPTG en una proporción de 1:1000 a un cultivo bacteriano de crecimiento exponencial, para obtener una concentración final de 1 mmol/L. La concentración utilizada depende de la fuerza de inducción requerida, así como del genotipo de células o plásmido utilizado. Si está presente lacI q , un mutante que sobreproduce el represor lac, puede ser necesaria una concentración más alta de IPTG. [4]

En la prueba de cribado azul-blanco , se utiliza IPTG junto con X-gal . La prueba de cribado azul-blanco permite identificar colonias que han sido transformadas con el plásmido recombinante en lugar de uno no recombinante en experimentos de clonación. [ cita requerida ] [5]

Referencias

  1. ^ Hansen LH, Knudsen S, Sørensen SJ (junio de 1998). "El efecto del gen lacY en la inducción de promotores inducibles por IPTG, estudiado en Escherichia coli y Pseudomonas fluorescens". Curr. Microbiol . 36 (6): 341–7. doi :10.1007/s002849900320. PMID  9608745. S2CID  22257399. Archivado desde el original el 18 de octubre de 2000.
  2. ^ Marbach A, Bettenbrock K (2012). "Inducción del operón lac en Escherichia coli: Comparación sistemática de la inducción de IPTG y TMG e influencia de la transacetilasa LacA". Revista de biotecnología . 157 (1): 82–8. doi :10.1016/j.jbiotec.2011.10.009. PMID  22079752.
  3. ^ https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-aldrich/docs/Sigma-Aldrich/Product_Information_Sheet/i5502pis.pdf [ enlace roto ]
  4. ^ Células competentes BL21(DE3), células competentes BL21 (DE3)pLysS y manual de instrucciones de células competentes BL21 (revisión n.° 066004e ed.). La Jolla, CA: Stratagene. 2006. pág. 7.
  5. ^ https://www.agilent.com/Library/usermanuals/Public/200521.pdf [ URL básica PDF ]
  • IPTG unido a proteínas en el PDB
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