El método de Golgi

Técnica de tinción de plata para visualizar tejido nervioso bajo microscopio óptico

Neurona piramidal neocortical humana teñida mediante la técnica de Golgi. Observe la dendrita apical que se extiende verticalmente por encima del soma y las numerosas dendritas basales que irradian lateralmente desde la base del cuerpo celular. Fotografía de Bob Jacobs, Colorado College.

El método de Golgi es una técnica de tinción con plata que se utiliza para visualizar el tejido nervioso bajo microscopio óptico. El método fue descubierto por Camillo Golgi , un médico y científico italiano , quien publicó la primera imagen realizada con la técnica en 1873. ^[1] Inicialmente se denominó reacción negra ( la reazione nera ) de Golgi, pero se hizo más conocida como tinción de Golgi o, más tarde, método de Golgi.

La tinción de Golgi fue utilizada por el neuroanatomista español Santiago Ramón y Cajal (1852-1934) para descubrir una serie de hechos novedosos sobre la organización del sistema nervioso, lo que inspiró el nacimiento de la doctrina de la neurona . Finalmente, Ramón y Cajal mejoró la técnica utilizando un método que denominó "doble impregnación". La técnica de tinción de Ramón y Cajal, todavía en uso, se llama tinción de Cajal. ^[^{cita requerida}^]

Mecanismo

Las células del tejido nervioso están densamente empaquetadas y se puede obtener poca información sobre sus estructuras e interconexiones si se tiñen todas las células. Además, las delgadas extensiones filamentosas de las células neuronales, incluidos el axón y las dendritas de las neuronas, son demasiado delgadas y transparentes para ser vistas con las técnicas de tinción normales. El método de Golgi tiñe un número limitado de células al azar en su totalidad. El mecanismo por el cual esto sucede aún es en gran parte desconocido. ^[2] Las dendritas, así como el soma celular, están claramente teñidas en marrón y negro y pueden seguirse en toda su longitud, lo que permitió a los neuroanatomistas rastrear las conexiones entre las neuronas y hacer visible la compleja estructura de red de muchas partes del cerebro y la médula espinal .

La tinción de Golgi se consigue impregnando el tejido nervioso fijado con aldehído con dicromato de potasio y nitrato de plata . Las células así teñidas se rellenan mediante microcristalización de cromato de plata .

Técnica

Según SynapseWeb, ^[3] esta es la receta para la técnica de tinción de Golgi:

Sumerja un bloque (aproximadamente 10x5 mm) de tejido cerebral fijado con formaldehído (o perfundido con paraformaldehído y glutaraldehído ) en una solución acuosa al 2% de dicromato de potasio durante 2 días.
Seque brevemente el bloque con papel de filtro .
Sumerja el bloque en una solución acuosa de nitrato de plata al 2% durante otros 2 días.
Corte secciones de aproximadamente 20–100 μm de espesor.
Deshidratar rápidamente en etanol , aclarar y montar (por ejemplo, en Depex o Enthalan).

Esta técnica se ha perfeccionado desde entonces para sustituir el precipitado de plata por oro mediante la inmersión de la muestra en cloruro de oro y luego en ácido oxálico , seguido de la eliminación de la plata mediante tiosulfato de sodio . Esto conserva un mayor grado de estructura fina con los detalles ultraestructurales marcados por pequeñas partículas de oro. ^[4]

Cita

Ramón y Cajal dijo del método de Golgi:

Expresé la sorpresa que experimenté al ver con mis propios ojos los maravillosos poderes reveladores de la reacción cromo-plata y la ausencia de cualquier entusiasmo en el mundo científico suscitado por su descubrimiento.

Recuerdos de mi vida, vol. 2, Historia de mi trabajo científico . Madrid: Moya, 1917, pág. 76.

Referencias

^ Finger, Stanley (1994). Orígenes de la neurociencia: una historia de las exploraciones sobre la función cerebral . Oxford University Press. pág. 45. ISBN 9780195146943. OCLC 27151391. En 1873, Golgi publicó la primera imagen breve pero "adecuada" de la reazione nera (la reacción negra), que mostraba la célula nerviosa completa, incluido su cuerpo celular, axón y dendritas ramificadas.
^ Nicholls, JG (2001). De la neurona al cerebro . Sinauer Associates. pp. 5. ISBN 0878934391.
^ Spacek, J., Fiala, J. (28 de junio de 2002). "Visualización de espinas dendríticas". SynapseWeb. Archivado desde el original el 26 de junio de 2010. Consultado el 17 de junio de 2010 .{{cite web}}: CS1 maint: varios nombres: lista de autores ( enlace )
^ "Inicio – Springer".^{[ enlace muerto ]}

Enlaces externos

Fotomicrografía de una célula de la corteza teñida con el aparato de Golgi. Galería de imágenes IHC.
Impregnaciones de Golgi. Imágenes del cerebro de las moscas.
Visualización de espinas dendríticas mediante el método de Golgi. SynapseWeb. Incluye un estudio en tiempo real de la impregnación de Golgi.
Berrebi, Albert: Biología celular de las neuronas: estructura y métodos de estudio. (en PDF)
Imágenes de cortes cerebrales teñidos que incluyen las "neuronas teñidas con Golgi" en el proyecto BrainMaps

[1] Finger, Stanley (1994). Orígenes de la neurociencia: una historia de las exploraciones sobre la función cerebral . Oxford University Press. pág. 45. ISBN 9780195146943. OCLC 27151391. En 1873, Golgi publicó la primera imagen breve pero "adecuada" de la reazione nera (la reacción negra), que mostraba la célula nerviosa completa, incluido su cuerpo celular, axón y dendritas ramificadas.

[2] Nicholls, JG (2001). De la neurona al cerebro . Sinauer Associates. pp. 5. ISBN 0878934391.

[3] Spacek, J., Fiala, J. (28 de junio de 2002). "Visualización de espinas dendríticas". SynapseWeb. Archivado desde el original el 26 de junio de 2010. Consultado el 17 de junio de 2010 .{{cite web}}: CS1 maint: varios nombres: lista de autores ( enlace )

[4] "Inicio – Springer".^{[ enlace muerto ]}