Sinapto-pHluorina
La sinapto-pHluorina es un indicador óptico codificado genéticamente de la liberación y el reciclaje de vesículas. Se utiliza en neurociencia para estudiar la liberación de transmisores. Consiste en una forma sensible al pH de la proteína fluorescente verde (GFP) fusionada al lado luminal de una proteína de membrana asociada a vesículas (VAMP). En el pH ácido dentro de las vesículas transmisoras, la sinapto-pHluorina no es fluorescente ( se apaga ). Cuando se liberan vesículas, la sinapto-pHluorina queda expuesta al espacio extracelular neutro y la terminal presináptica se vuelve fluorescente brillante. Después de la endocitosis , las vesículas se vuelven a acidificar y el ciclo puede comenzar de nuevo. La alcalinización química de todas las vesículas se utiliza a menudo para la normalización de las señales de la sinapto-pHluorina. La sinapto-pHluorina a veces consta de proteína fluorescente amarilla (YFP) para controlar el citoplasma porque su pKa es más alto que la GFP ( 7,1 frente a 6,0). [1]
Historia
Gero Miesenböck inventó la sinapto-pHluorin en 1998. [2] En 2006, se publicó una versión mejorada que utiliza sinaptofisina para dirigir la GFP a las vesículas. [3] En 2013, se introdujo un sensor de liberación de dos colores (ratio-sypHy) para determinar el tamaño del grupo de reciclaje en sinapsis individuales. [4]
Aplicaciones
Los neurobiólogos utilizan principalmente Synapto-pHluorin para estudiar la liberación y el reciclaje de transmisores en las terminales presinápticas . [4] También se ha aplicado al estudio de la secreción de insulina en las células beta del páncreas . [5]
Referencias
- ^ Ashby, Michael C.; Ibaraki, Kyoko; Henley, Jeremy M. (mayo de 2004). "Es verde afuera: seguimiento de proteínas de la superficie celular con GFP sensible al pH". Tendencias en neurociencias . 27 (5): 257–261. doi :10.1016/j.tins.2004.03.010. PMID 15111007. S2CID 23124974.
- ^ Miesenböck, Gero; De Angelis, Dino A.; Rothman, James E. (julio de 1998). "Visualización de la secreción y la transmisión sináptica con proteínas fluorescentes verdes sensibles al pH". Nature . 394 (6689): 192–195. Bibcode :1998Natur.394..192M. doi :10.1038/28190. ISSN 1476-4687. PMID 9671304. S2CID 4320849.
- ^ Granseth, Björn; Odermatt, Benjamin; Royle, Stephen J.; Lagnado, Leon (septiembre de 2006). "La endocitosis mediada por clatrina es el mecanismo dominante de recuperación de vesículas en las sinapsis del hipocampo". Neuron . 51 (6): 773–786. doi : 10.1016/j.neuron.2006.08.029 . PMID 16982422.
- ^ ab Rose, Tobias; Schoenenberger, Philipp; Jezek, Karel; Oertner, Thomas G. (2013). "Refinamiento del desarrollo del ciclo de vesículas en las sinapsis colaterales de Schaffer". Neuron . 77 (6): 1109–1121. doi : 10.1016/j.neuron.2013.01.021 . PMID 23522046.
- ^ Tsuboi, Takashi; Rutter, Guy A. (abril de 2003). "Múltiples formas de exocitosis de "beso y fuga" reveladas mediante microscopía de ondas evanescentes". Current Biology . 13 (7): 563–567. doi : 10.1016/S0960-9822(03)00176-3 . PMID 12676086.
