Portaobjetos de microscopio

Un portaobjetos de microscopio es una pieza delgada y plana de vidrio , normalmente de 75 x 26 mm (3 x 1 pulgadas) y aproximadamente 1 mm de espesor, que se utiliza para sostener objetos para su examen bajo un microscopio . Normalmente, el objeto se monta (se fija) en el portaobjetos y luego ambos se insertan juntos en el microscopio para su observación. Esta disposición permite insertar y retirar rápidamente varios objetos montados en portaobjetos del microscopio, etiquetarlos, transportarlos y almacenarlos en estuches o carpetas para portaobjetos adecuados, etc.

Los portaobjetos de microscopio suelen utilizarse junto con un cubreobjetos o un cubreobjetos, una lámina de vidrio más pequeña y delgada que se coloca sobre la muestra. Los portaobjetos se mantienen en su lugar en la platina del microscopio mediante pinzas para portaobjetos, abrazaderas para portaobjetos o una mesa en cruz que se utiliza para lograr un movimiento preciso y remoto del portaobjetos sobre la platina del microscopio (como en un sistema automatizado/operado por computadora, o donde tocar el portaobjetos con los dedos no es apropiado debido al riesgo de contaminación o la falta de precisión).

El origen del concepto fueron piezas de marfil o hueso , que contenían especímenes sostenidos entre discos de mica transparente , que se deslizaban hacia el espacio entre la platina y el objetivo. ^[1] Estos "deslizadores" fueron populares en la Inglaterra victoriana hasta que la Royal Microscopical Society introdujo el portaobjetos de vidrio estandarizado para microscopio. ^[2]

Un portaobjetos de microscopio estándar mide aproximadamente 75 mm por 25 mm (3″ por 1″) y tiene aproximadamente 1 mm de espesor. Hay una variedad de otros tamaños disponibles para diversos fines especiales, como 75 x 50 mm para uso geológico , 46 ​​x 27 mm para estudios petrográficos y 48 x 28 mm para secciones delgadas . Los portaobjetos generalmente están hechos de vidrio común y sus bordes a menudo están finamente pulidos.

Los portaobjetos de microscopio suelen estar hechos de vidrio de calidad óptica , como vidrio sódico-cálcico o vidrio de borosilicato , pero también se utilizan plásticos especiales. Los portaobjetos de cuarzo fundido se utilizan a menudo cuando la transparencia ultravioleta es importante, por ejemplo, en la microscopía de fluorescencia . ^{[3] [4]}

Aunque los portaobjetos lisos son los más comunes, existen varios tipos especializados. Un portaobjetos con concavidad o con cavidad tiene una o más depresiones poco profundas ("pozos"), diseñadas para sostener objetos ligeramente más gruesos y ciertas muestras, como líquidos y cultivos de tejidos . ^[5] Los portaobjetos pueden tener esquinas redondeadas para mayor seguridad o robustez, o una esquina recortada para usar con una abrazadera de portaobjetos o una mesa transversal, donde el portaobjetos está asegurado por un brazo curvo con resorte que contacta una esquina, forzando la esquina opuesta del portaobjetos contra un brazo en ángulo recto que no se mueve. Si este sistema se usara con un portaobjetos que no incorporara estas esquinas recortadas, las esquinas se astillarían y el portaobjetos podría romperse. ^[5]

Una lámina de retícula está marcada con una cuadrícula de líneas (por ejemplo, una cuadrícula de 1 mm) que permite estimar fácilmente el tamaño de los objetos vistos con aumento y proporciona áreas de referencia para contar objetos diminutos. A veces, un cuadrado de la cuadrícula se subdivide en una cuadrícula más fina. Las láminas para aplicaciones especializadas, como los hemocitómetros para el recuento de células, pueden tener varios depósitos, canales y barreras grabados o pulidos en su superficie superior. ^{[6] El fabricante puede} imprimir , pulir con chorro de arena o depositar sobre la superficie varias marcas o máscaras permanentes , generalmente con materiales inertes como PTFE . ^[7]

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  Un portaobjetos de Neubauer para el recuento de células.
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  Imagen de microscopio de la retícula de un portaobjetos de Neubauer que se utiliza para contar células .
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  Un portaobjetos de Neubauer sujeto en su lugar sobre un soporte de microscopio mediante una abrazadera para portaobjetos sobre una mesa transversal.
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  Portaobjetos de microscopio estándar (75 x 25 mm o 3 x 1″) y grande (75 x 51 mm o 3 x 2″).

Algunas láminas tienen un área esmerilada o recubierta de esmalte en un extremo, para etiquetarlas con un lápiz o bolígrafo. ^[5] Las láminas pueden tener recubrimientos especiales aplicados por el fabricante, por ejemplo, para inercia química o adhesión celular mejorada . El recubrimiento puede tener una carga eléctrica permanente para sujetar muestras delgadas o en polvo. Los recubrimientos comunes incluyen poli-L-lisina , silanos , resinas epoxi , ^{[5] [7]} o incluso oro . ^[8]

El montaje de muestras en portaobjetos de microscopio suele ser fundamental para una visualización satisfactoria. Se le ha prestado mucha atención a este problema en los dos últimos siglos y es un área bien desarrollada con muchas técnicas especializadas y, a veces, bastante sofisticadas. Las muestras se suelen sujetar en su lugar utilizando cubreobjetos de vidrio más pequeños .

La función principal del cubreobjetos es mantener las muestras sólidas presionadas de manera plana y las muestras líquidas formadas en una capa plana de espesor uniforme. Esto es necesario porque los microscopios de alta resolución tienen una región muy estrecha dentro de la cual enfocan.

El cubreobjetos suele tener otras funciones. Mantiene la muestra en su lugar (ya sea por el peso del cubreobjetos o, en el caso de un montaje húmedo, por la tensión superficial ) y protege la muestra del polvo y el contacto accidental. Protege la lente del objetivo del microscopio del contacto con la muestra y viceversa; en la microscopía de inmersión en aceite o en la microscopía de inmersión en agua, el cubreobjetos evita el contacto entre el líquido de inmersión y la muestra. El cubreobjetos se puede pegar al portaobjetos para sellar la muestra, lo que retrasa la deshidratación y la oxidación de la muestra y también evita la contaminación. Se utilizan varios selladores, incluidos selladores comerciales, preparaciones de laboratorio o incluso esmalte de uñas transparente normal , según la muestra. Un sellador sin disolventes que se puede utilizar para muestras de células vivas es "valap", una mezcla de vaselina , lanolina y parafina en partes iguales. ^{[9] Los cultivos} microbianos y celulares se pueden cultivar directamente en el cubreobjetos antes de colocarlo en el portaobjetos, y las muestras se pueden montar permanentemente en el cubreobjetos en lugar de en el portaobjetos. ^[9]

Los cubreobjetos están disponibles en una variedad de tamaños y espesores. ^[10] El uso de un espesor incorrecto puede provocar aberraciones esféricas y una reducción de la resolución y la intensidad de la imagen. Se pueden utilizar objetivos especiales para obtener imágenes de muestras sin cubreobjetos, o pueden tener collares de corrección que permiten al usuario adaptarse a un espesor de cubreobjetos alternativo. ^{[11] [12]}

En un montaje en seco , el tipo de montaje más simple, el objeto simplemente se coloca sobre el portaobjetos. Se puede colocar un cubreobjetos encima para proteger la muestra y el objetivo del microscopio y para mantener la muestra quieta y presionada de manera plana. Este montaje se puede utilizar con éxito para ver muestras como polen, plumas, pelos, etc. También se utiliza para examinar partículas atrapadas en filtros de membrana transparentes (por ejemplo, en el análisis de polvo en suspensión ).

En un montaje húmedo , la muestra se coloca en una gota de yodo u otro líquido que se mantiene entre el portaobjetos y el cubreobjetos por tensión superficial. Este método se utiliza comúnmente, por ejemplo, para observar organismos microscópicos que crecen en el agua de estanques u otros medios líquidos, especialmente lagos.

Para la investigación patológica y biológica , la muestra generalmente se somete a una preparación histológica compleja que implica fijarla para evitar la descomposición, eliminar el agua que contiene, reemplazar el agua con parafina , cortarla en secciones muy delgadas usando un micrótomo , colocar las secciones en un portaobjetos de microscopio, teñir el tejido con varias tinciones para revelar componentes específicos del tejido, aclarar el tejido para hacerlo transparente y cubrirlo con un cubreobjetos y un medio de montaje.

El montaje esparcido describe la producción de portaobjetos de microscopio palinológico suspendiendo una muestra concentrada en agua destilada , colocando las muestras en un portaobjetos y dejando que el agua se evapore . ^[13]

El medio de montaje es la solución en la que se incrusta la muestra, generalmente debajo de un cubreobjetos. Los líquidos simples como el agua o el glicerol pueden considerarse medios de montaje, aunque el término generalmente se refiere a compuestos que se endurecen en un montaje permanente. Los medios de montaje populares incluyen Permount , ^[14] y el medio de montaje de Hoyer y una gelatina de glicerina alternativa ^[15]. Las propiedades de un buen medio de montaje incluyen tener un índice de refracción cercano al del vidrio (1.518), no reactividad con la muestra, estabilidad en el tiempo sin cristalizar, oscurecer o cambiar el índice de refracción, solubilidad en el medio en el que se preparó la muestra (ya sea acuoso o no polar , como xileno o tolueno ), y no hacer que la mancha de la muestra se desvanezca o se filtre. ^[16]

Se utiliza comúnmente en citoquímica inmunofluorescente donde no se puede archivar la fluorescencia. El almacenamiento temporal debe realizarse en una cámara oscura y húmeda. Algunos ejemplos comunes son:

1. Glicerol-PBS (9:1) con antiquench, por ejemplo, cualquiera de los siguientes ^[17]
   1. p-fenilendiamina
   2. galato de propilo
   3. 1,4-diazabiciclo (2,2,2)-octano (DABCO) (muy popular)
   4. Ácido ascórbico
   5. Mowiol o Gelvatol
2. Gelatina
3. Montar
4. Escudo de vecta
5. Prolongar el oro
6. CyGEL / CyGEL Sustain (para inmovilizar células y organismos vivos no fijados)

Se utiliza cuando se requiere un montaje permanente.

1. Permount (tolueno y un polímero de a-pineno, b-pineno, dipenteno, b-felandreno)
2. Bálsamo de Canadá
3. DPX ( D istrene 80, un poliestireno comercial , un plastificante , por ejemplo, ftalato de dibutilo y xileno )
4. DPX nuevo (con xileno pero libre de ftalato de dibutilo cancerígeno )
5. Entellan (con tolueno)
6. Entellan nuevo
7. Medio Hoyer's de haluro de Hempstead (una fórmula patentada del medio Hoyer's tradicional que contiene un 60 % de cloral , pero libre de carcinógenos conocidos)
8. Neo-Mount (compatible con neo-clear alifático pero no compatible con solventes aromáticos como el xileno)

A diferencia del montaje necesario para los cubreobjetos de vidrio, se puede realizar un montaje similar para la conservación de muestras más voluminosas en recipientes de vidrio en museos. Sin embargo, se realiza un tipo de montaje completamente diferente para la preparación de muestras , que puede ser para materiales biológicos o no biológicos y se subdivide a su vez en procesos de montaje de tipo "caliente" (compresión) y "frío" (moldeable). ^{[18] [19]} Aunque se denomina "montaje", es más parecido a la incrustación en histología y no debe confundirse con el montaje descrito anteriormente. El término montaje en otros campos tiene muchos otros significados.

• Placa de Petri

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