Carga viral
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La carga viral , también conocida como carga viral , es una expresión numérica de la cantidad de virus en un volumen dado de fluido, incluyendo muestras biológicas y ambientales. No debe confundirse con el título viral o título viral , que depende del ensayo. Cuando se realiza un ensayo para medir la partícula viral infecciosa (ensayo de placa, ensayo de foco), el título viral a menudo se refiere a la concentración de partículas virales infecciosas, que es diferente de las partículas virales totales . La carga viral se mide utilizando fluidos corporales esputo [1] y plasma sanguíneo . [2] Como ejemplo de muestras ambientales, la carga viral del norovirus se puede determinar a partir del agua de escorrentía en productos del jardín. [3] El norovirus no solo tiene una eliminación viral prolongada y tiene la capacidad de sobrevivir en el medio ambiente, sino que se requiere una dosis infecciosa minúscula para producir infección en humanos: menos de 100 partículas virales. [4]
La carga viral se expresa a menudo como partículas virales (viriones) o partículas infecciosas por ml, según el tipo de ensayo. Una carga viral, un título o una carga viral más altos suelen estar relacionados con la gravedad de una infección viral activa . La cantidad de virus por ml se puede calcular estimando la cantidad de virus vivos en un líquido afectado. Por ejemplo, se puede expresar en copias de ARN por mililitro de plasma sanguíneo.
El seguimiento de la carga viral se utiliza para controlar la terapia durante infecciones virales crónicas y en pacientes inmunodeprimidos, como los que se recuperan de un trasplante de médula ósea o de un órgano sólido . Actualmente, existen pruebas de rutina disponibles para el VIH -1, el citomegalovirus , el virus de la hepatitis B y el virus de la hepatitis C. El seguimiento de la carga viral del VIH es de particular interés en el tratamiento de las personas con VIH , ya que esto se discute continuamente en el contexto del manejo del VIH/SIDA . Una carga viral indetectable no implica una ausencia de infección. Los pacientes VIH positivos en terapia antirretroviral combinada a largo plazo pueden presentar una carga viral indetectable en la mayoría de los ensayos clínicos, ya que la concentración de partículas virales está por debajo del límite de detección (LOD).
Tecnologías para la prueba de carga viral
Un estudio de revisión de 2010 realizado por Puren et al. [2] clasifica las pruebas de carga viral en tres tipos: (1) pruebas basadas en amplificación de ácidos nucleicos ( NAT o NAAT) disponibles comercialmente en los Estados Unidos con la aprobación de la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA), o en el mercado en el Espacio Económico Europeo (EEE) con la marca CE ; (2) NAT "caseras" o de elaboración propia; (3) pruebas no basadas en ácidos nucleicos. [ cita requerida ]
Pruebas basadas en ácidos nucleicos (NAT)
Existen muchos métodos de prueba moleculares diferentes para cuantificar la carga viral mediante NAT. El material de partida para la amplificación se puede utilizar para dividir estos métodos moleculares en tres grupos: [5]
- Amplificación de dianas que utiliza el propio ácido nucleico. Algunos de los métodos más comunes
- El método de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para la síntesis de ADN in vitro utiliza una plantilla de ADN , polimerasa , tampones, cebadores y nucleótidos para multiplicar el VIH en la muestra de sangre. Luego, una reacción química marca el virus. Los marcadores se miden y se utilizan para calcular la cantidad de virus. La PCR se utiliza para cuantificar el ADN integrado .
- La reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa (RT-PCR) es una variante de la PCR que se puede utilizar para cuantificar el ARN viral. El ARN se utiliza como material de partida para este método y se convierte en ADN bicatenario mediante la enzima transcriptasa inversa (RT) para PCR.
- El método de amplificación basada en secuencias de ácidos nucleicos (NASBA) es una variante del sistema de amplificación basado en transcripción (TAS) de la PCR. Se utiliza ARN como diana y se hace una copia de ADN. Luego, la copia de ADN se transcribe en ARN y se amplifica. Existen varias variantes comerciales de TAS, entre ellas la amplificación mediada por transcripción (TMA) y la replicación de secuencia autosostenida (3SR).
- La amplificación específica de sondas utiliza sondas sintéticas que se unen preferentemente a una secuencia objetivo. Las sondas luego se amplifican
- La amplificación de señales utiliza grandes cantidades de señal ligada a un objetivo no amplificado que se encuentra originalmente presente en la muestra. Un método comúnmente utilizado:
- El método del ADN ramificado (bDNA) puede utilizar ADN o ARN como ácido nucleico diana. Sondas cortas se adhieren a un soporte sólido y capturan el ácido nucleico diana. Las sondas extensoras adicionales también se unen al ácido nucleico diana y a numerosas moléculas indicadoras que se utilizan para aumentar la intensidad de la señal, que se convierte en un recuento viral.
Muestras de plasma
El plasma con EDTA y las muestras de sangre con EDTA son una buena fuente de ARN viral libre de células para las pruebas de carga viral basadas en ARN. La extracción de ARN del plasma requiere equipo especializado, reactivos y capacitación, que pueden estar fuera del alcance de los laboratorios medianos a pequeños. Se necesita una muestra grande (> 1 ml de plasma) que requiere venopunción .
Almacenamiento
La sangre con EDTA se puede almacenar a temperatura ambiente durante 30 horas y el plasma separado durante períodos prolongados a -70 °C sin disminuciones significativas en la carga viral.
Medición
La carga viral se expresa en copias de ARN del VIH en un mililitro (mL) de sangre. Los cambios en la carga viral se expresan generalmente en forma de cambio logarítmico (en potencias de 10). Por ejemplo, un aumento de tres logaritmos en la carga viral (3 log10) es un aumento de 10 3 o 1.000 veces el nivel informado previamente, mientras que una caída de 500.000 a 500 copias sería una caída de tres logaritmos (también 3 log10). [ cita requerida ]
Otros factores que afectan la carga viral
Los distintos métodos de análisis suelen dar resultados diferentes para la misma muestra de paciente. Para que sea posible realizar comparaciones, se debe utilizar el mismo método de análisis (amplificación de diana, amplificación específica de sonda o amplificación de señal) cada vez que se analiza una muestra de paciente. Lo ideal es que las pruebas de los pacientes se realicen en el mismo laboratorio médico, utilizando la misma prueba de carga viral y el mismo analizador.
Véase también
Referencias
- ^ Wölfel, romano; Corman, Víctor M.; Guggemos, Wolfgang; Seilmaier, Michael; Zange, Sabine; Müller, Marcel A.; Niemeyer, Daniela; Jones, Terry C.; Vollmar, Patricio; Rothe, Camila ; Hoelscher, Michael; Bleicker, Tobías; Brünink, Sebastián; Schneider, Julia; Ehmann, Rosina; Zwirglmaier, Katrin; Drosten, cristiano; Wendtner, Clemens (2020). "Evaluación virológica de pacientes hospitalizados con COVID-2019". Naturaleza . 581 (7809): 465–469. Código Bib :2020Natur.581..465W. doi : 10.1038/s41586-020-2196-x . Número de modelo: PMID32235945.
- ^ ab Puren, Adrian; Gerlach, Jay L.; Weigl, Bernhard H.; Kelso, David M.; Domingo, Gonzalo J. (2010). "Operaciones de laboratorio, procesamiento de muestras y manipulación para pruebas y vigilancia de carga viral". The Journal of Infectious Diseases . 201 : S27–36. doi : 10.1086/650390 . PMID 20225943.
- ^ Shaheen, Mohamed NF; Elmahdy, Elmahdy M.; Chawla-Sarkar, Mamta (2019). "Identificación cuantitativa basada en PCR de virus entéricos que contaminan productos frescos y aguas superficiales utilizadas para riego en Egipto". Environmental Science and Pollution Research . 26 (21): 21619–21628. Bibcode :2019ESPR...2621619S. doi :10.1007/s11356-019-05435-0. PMID 31129895. S2CID 167210903.
- ^ Robilotti, Elizabeth; Deresinski, Stan; Pinsky, Benjamin A. (2015). "Norovirus". Clinical Microbiology Reviews . 28 (1): 134–164. doi :10.1128/CMR.00075-14. PMC 4284304 . PMID 25567225.
- ^ Buckingham, L.; Flaws, ML (2007). Fundamentos, métodos y aplicaciones clínicas del diagnóstico molecular (PDF) . FA Davis Company. págs. 121–154. ISBN 978-0-8036-1659-2. Recuperado el 7 de septiembre de 2020 .
