IMViC
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Las pruebas IMViC son un grupo de pruebas individuales que se utilizan en los análisis de laboratorio de microbiología para identificar un organismo del grupo de los coliformes . Un coliforme es un bacilo gramnegativo , aeróbico o anaeróbico facultativo , que produce gas a partir de la lactosa en 48 horas. La presencia de algunos coliformes indica contaminación fecal.
El término "IMViC" es un acrónimo para cada una de estas pruebas. "I" es para la prueba de indol ; "M" es para la prueba de rojo de metilo ; "V" es para la prueba de Voges-Proskauer y "C" es para la prueba de citrato . La "i" minúscula es simplemente para "en", ya que la prueba de citrato requiere que las muestras de coliformes se coloquen "en citrato".
Estas pruebas son útiles para distinguir los miembros de Enterobacteriaceae .
Prueba de indol
En esta prueba, el organismo en cuestión se cultiva en un caldo de agua de peptona. Contiene triptófano , que bajo la acción de la enzima triptofanasa se convierte en una molécula de indol , piruvato y amonio. Luego, el indol se extrae del caldo por medio de xileno. El caldo se esteriliza durante 15 minutos a aproximadamente 121 °C. Para probar la producción de indol en el caldo, se utiliza el reactivo de Kovac . El reactivo de Kovac consiste en alcohol amílico, para-dimetilaminobenzaldehído y ácido clorhídrico concentrado . El reactivo de Kovac se usa realmente para determinar la capacidad de un organismo para separar el indol del aminoácido triptófano y se agrega después de la incubación. Un resultado positivo se indica mediante una capa rosada/roja que se forma sobre el líquido.
Rojo de metilo y prueba de Voges-Proskauer
En ambas pruebas se utiliza el mismo caldo para el crecimiento bacteriano. El caldo se denomina caldo MR-VP. Después del crecimiento, el caldo se separa en dos tubos diferentes, uno para la prueba del rojo de metilo (MR) y otro para la prueba de Voges-Proskauer (VP) .
La prueba del rojo de metilo detecta la producción de ácidos formados durante el metabolismo mediante la vía de fermentación ácida mixta utilizando piruvato como sustrato. Se añade el indicador de pH rojo de metilo a un tubo y aparece un color rojo con un pH inferior a 4,2, lo que indica una prueba positiva (se utiliza la fermentación ácida mixta). La solución que permanece amarilla (pH = 6,2 o superior) indica una prueba negativa, lo que significa que se utiliza la fermentación del butanodiol .
La prueba VP utiliza alfa-naftol e hidróxido de potasio para detectar la presencia de acetilmetilcarbinol (acetoína), un intermediario de la vía de fermentación del 2,3-butanodiol. Después de agregar ambos reactivos, se agita el tubo vigorosamente y se lo deja reposar durante 5 a 10 minutos. Un color rojo rosado indica una prueba positiva, lo que significa que se utiliza la vía de fermentación del 2,3-butanodiol.
Prueba de citrato
En la década de 1930, SA Koser realizó experimentos que se utilizaron para estudiar el catabolismo bacteriano de los ácidos orgánicos. [1] Koser descubrió que el metabolismo del citrato podría ser un indicador de las bacterias que se encuentran en entornos naturales. Además, el citrato podría usarse para distinguir las coilforms bacterianas que se encuentran en el suelo y en entornos acuáticos, como Enterobacteiaceae , y las coilforms con contaminación fecal. Se descubrió que las coilforms sin contaminación fecal crecían, mientras que las coilforms con contaminación fecal no crecían.
Esta prueba utiliza el agar citrato de Simmons para determinar la capacidad de un microorganismo de utilizar el citrato como su única fuente de carbono y energía. El agar contiene iones de citrato y amonio (fuente de nitrógeno) y azul de bromotimol (BTB) como indicador de pH. [2] Se añadió azul de bromotimol para reducir los falsos positivos. El agar citrato es verde antes de la inoculación y se vuelve azul debido al BTB como indicador de prueba positiva, lo que significa que se utiliza citrato. La prueba también se prepara en una pendiente para maximizar el crecimiento bacteriano y obtener una indicación aún mejor del uso de citrato.
Uso
Estas pruebas IMViC son útiles para diferenciar la familia Enterobacteriaceae , especialmente cuando se utilizan junto con la prueba de ureasa .
A continuación se muestran los resultados de IMViC de algunas especies importantes. [3]
| Especies | Indol | Rojo de metilo | Proskauer de los Voges | Citrato |
|---|---|---|---|---|
| Escherichia coli | Positivo | Positivo | Negativo | Negativo |
| Estafilococo áureo | Negativo | Positivo | Positivo | Negativo |
| Especies de Shigella [4] | Negativo | Positivo | Negativo | Negativo |
| Especies de Salmonella | Negativo | Positivo | Negativo | Positivo |
| Especies de Klebsiella . | Negativo | Negativo | Positivo | Positivo |
| Proteo vulgaris [5] | Positivo | Positivo | Negativo | Negativo |
| Proteus mirabilis | Negativo | Positivo | Negativo | Positivo |
| Citrobacter freundii | Negativo | Positivo | Negativo | Positivo |
| Enterobacter aerogenes | Negativo | Negativo | Positivo | Positivo |
Referencias
- ^ MacWilliams, Maria P. (8 de diciembre de 2009). "Protocolo de prueba de citrato" (PDF) . Sociedad Estadounidense de Microbiología . Consultado el 16 de abril de 2023 .
- ^ Tankeshwar, Acharya (17 de mayo de 2013). "Prueba de utilización de citrato: principio, procedimiento, resultados • Microbe Online". Microbe Online . Consultado el 16 de abril de 2023 .
- ^ Ananthanarayan, R; Jayaram Paniker, CK (2005). Libro de texto de microbiología de Ananthanarayan y Paniker . Chennai , India : Orient Longman . ISBN 8125028080.
- ^ Microbiología en imágenes
- ^ Biblioteca de microbios «Pruebas IMViC de Proteus vulgaris - Biblioteca». Archivado desde el original el 19 de enero de 2013. Consultado el 5 de enero de 2013 .
