Microinyección
La microinyección es el uso de una micropipeta de vidrio para inyectar una sustancia líquida a nivel microscópico o casi macroscópico . El objetivo suele ser una célula viva, pero también puede incluir el espacio intercelular. La microinyección es un proceso mecánico simple que generalmente implica un microscopio invertido con un poder de aumento de alrededor de 200x (aunque a veces se realiza utilizando un microscopio estereoscópico de disección a 40-50x o un microscopio vertical compuesto tradicional con un poder similar al de un modelo invertido).
Para procesos como la inyección celular o pronuclear , la célula diana se coloca bajo el microscopio y se utilizan dos micromanipuladores —uno que sostiene la pipeta y otro que sostiene una aguja microcapilar generalmente entre 0,5 y 5 μm de diámetro (más grande si se inyectan células madre en un embrión)— para penetrar la membrana celular y/o la envoltura nuclear . [1] De esta manera, el proceso puede usarse para introducir un vector en una sola célula. La microinyección también puede usarse en la clonación de organismos, en el estudio de la biología celular y los virus, y para tratar la subfertilidad masculina mediante la inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI, / ˈ ɪ k s i / IK -ver ).
Historia
El uso de la microinyección como procedimiento biológico comenzó a principios del siglo XX, aunque incluso durante la década de 1970 no se utilizaba comúnmente. En la década de 1990, su uso se había intensificado significativamente y ahora se considera una técnica de laboratorio común, junto con la fusión de vesículas , la electroporación , la transfección química y la transducción viral , para introducir una pequeña cantidad de una sustancia en un objetivo pequeño. [2]
Tipos básicos
Existen dos tipos básicos de sistemas de microinyección. El primero se denomina sistema de flujo constante y el segundo se denomina sistema de flujo pulsado . En un sistema de flujo constante, que es relativamente simple y económico, aunque torpe y anticuado, se administra un flujo constante de una muestra desde una micropipeta y la cantidad de muestra que se inyecta se determina según el tiempo que la aguja permanece en la célula. Este sistema normalmente requiere una fuente de presión regulada, un soporte capilar y un micromanipulador grueso o fino. Sin embargo, un sistema de flujo pulsado permite un mayor control y consistencia sobre la cantidad de muestra inyectada: la disposición más común para la inyección intracitoplasmática de espermatozoides incluye un inyector Eppendorf "Femtojet" acoplado a un Eppendorf "InjectMan", aunque los procedimientos que involucran otros objetivos generalmente aprovechan equipos mucho menos costosos de capacidad similar. Debido a su mayor control sobre la colocación y el movimiento de la aguja y además de la mayor precisión sobre el volumen de sustancia administrada, la técnica de flujo pulsado generalmente produce menos daño a la célula receptora que la técnica de flujo constante. Sin embargo, la línea Eppendorf, al menos, tiene una interfaz de usuario compleja y sus componentes de sistema particulares suelen ser mucho más caros que los necesarios para crear un sistema de flujo constante o que otros sistemas de inyección de flujo pulsado. [3]
Inyección pronuclear
La inyección pronuclear es una técnica que se utiliza para crear organismos transgénicos mediante la inyección de material genético en el núcleo de un ovocito fecundado . Esta técnica se utiliza habitualmente para estudiar el papel de los genes utilizando modelos animales de ratón.
Inyección pronuclear en ratones
La inyección pronuclear de esperma de ratón es uno de los dos métodos más comunes para producir animales transgénicos (junto con la ingeniería genética de células madre embrionarias ). [4] Para que la inyección pronuclear tenga éxito, el material genético (normalmente ADN lineal ) debe inyectarse mientras el material genético del ovocito y el espermatozoide están separados (es decir, la fase pronuclear ). [5] Para obtener estos ovocitos, los ratones suelen ser superovulados utilizando gonadotropinas . [6] Una vez que se ha producido el taponamiento , se extraen los ovocitos del ratón y se les inyecta el material genético. A continuación, el ovocito se implanta en el oviducto de un animal pseudopreñado . [5] Aunque la eficacia varía, entre el 10 y el 40 % de los ratones nacidos a partir de estos ovocitos implantados pueden contener la construcción inyectada . [6] A continuación, se pueden criar ratones transgénicos para crear líneas transgénicas.
Véase también
Referencias
- ^ David B. Burr; Matthew R. Allen (11 de junio de 2013). Biología ósea básica y aplicada. Académico. p. 157. ISBN 978-0-12-391459-0. Recuperado el 15 de julio de 2013 .
- ^ Juan Carlos Lacal; Rosario Perona; James Feramisco (11 de junio de 1999). Microinyección. Saltador. pag. 9.ISBN 978-3-7643-6019-1. Recuperado el 13 de julio de 2013 .
- ^ Robert D. Goldman; David L. Spector (1 de enero de 2005). Imágenes de células vivas: manual de laboratorio. CSHL. pág. 54. ISBN 978-0-87969-683-2. Recuperado el 15 de julio de 2013 .
- ^ Heinz Peter Nasheuer (2010). Estabilidad del genoma y enfermedades humanas. Springer. pág. 328. ISBN 978-90-481-3471-7. Recuperado el 15 de julio de 2013 .
- ^ ab Mullin, Ann. "Inyección pronuclear". Universidad de Tulane.
- ^ ab "Pronuclear Injection". UC San Diego . Consultado el 6 de diciembre de 2019 .
