Agar tiosulfato-citrato-sales biliares-sacarosa

El agar tiosulfato-citrato-sales biliares-sacarosa , o agar TCBS , es un tipo de placa de cultivo de agar selectivo que se utiliza en los laboratorios de microbiología para aislar especies de Vibrio . ^[1] El agar TCBS es altamente selectivo para el aislamiento de V. cholerae y V. parahaemolyticus , así como otras especies de Vibrio . Además del agar TCBS, también se utilizan otras tiras reactivas de prueba rápida como la tira reactiva inmunocromatográfica en áreas endémicas como Asia, África y América Latina. Sin embargo, el estudio en agar TCBS es necesario para la confirmación. Esto se vuelve inmensamente importante en casos de gastroenteritis causada por especies de Campylobacter, cuyos síntomas imitan los del cólera. Dado que no se observa crecimiento bacteriano amarillo en caso de especies de Campylobacter en agar TCBS, se pueden rectificar las posibilidades de un diagnóstico incorrecto. El agar TCBS contiene altas concentraciones de tiosulfato de sodio y citrato de sodio para inhibir el crecimiento de Enterobacteriaceae . La inhibición de las bacterias grampositivas se logra mediante la incorporación de hiel de buey , que es una sustancia natural que contiene una mezcla de sales biliares y colato de sodio , una sal biliar pura . El tiosulfato de sodio también sirve como fuente de azufre y su presencia, en combinación con citrato férrico, permite la fácil detección de la producción de sulfuro de hidrógeno . La sacarosa ( sacarosa ) se incluye como un carbohidrato fermentable para el metabolismo de las especies de Vibrio . El pH alcalino del medio mejora la recuperación de V. cholerae e inhibe el crecimiento de otros. El azul de timol y el azul de bromotimol se incluyen como indicadores de cambios de pH. ^[2]

Cantidades aproximadas por litro ^[3]

• Extracto de levadura 5,0 g
• Peptona de proteosa 10,0 g
• Tiosulfato de sodio 10,0 g
• Citrato de sodio 10,0 g
• Hiel de buey 5,0 g
• Colato de sodio 3,0 g
• Sacarosa 20,0 g
• Cloruro de sodio 10,0 g
• Citrato férrico 1,0 g
• Azul de bromotimol 0,04 g
• Azul de timol 0,04 g
• Agar 15,0 g

pH 8,6 ± 0,2 a 25 °C

Morfología típica de la colonia ^{[2] [4]}

• V. cholerae : grandes colonias amarillas.
• V. parahaemolyticus : Colonias con centros de color azul a verde.
• V. alginolyticus : Grandes colonias mucoides amarillas.
• V. harveyi / V. fischeri : colonias de color verde grisáceo a verde azulado que muestran luminiscencia en la oscuridad. Las colonias más viejas no muestran bioluminiscencia.
• Proteus / Enterococci : inhibición parcial. Si hay crecimiento, las colonias son pequeñas y de color entre amarillo y translúcido.
• Pseudomonas / Aeromonas : inhibición parcial. Si hay crecimiento, las colonias son azules.

Las bacterias que no son Vibrio pero que producen sulfuro de hidrógeno crecen como pequeñas colonias negras. Esto se debe a que el sulfuro de hidrógeno producido a partir del tiosulfato, que actúa como fuente de azufre y crea una tensión de oxígeno reducida en la que Vibrio puede crecer debido a su naturaleza anaeróbica facultativa, se combina con los iones férricos del citrato férrico para producir sulfuro férrico, que es de color negro.

El agar TCBS es selectivo y diferencial. Es altamente selectivo para las especies de Vibrio y diferencial debido a la presencia de sacarosa y colorantes. La fermentación de la sacarosa produce ácido, que convierte el color del azul de bromotimol o azul de timol. Dos colorantes en lugar de uno hacen que el medio produzca una variedad de amarillo, verde o azul, de modo que es posible diferenciar entre varias especies de Vibrio .

El agar TCBS también se ha utilizado para controlar los brotes de la estrella de mar corona de espinas ( Acanthaster planci ), que supone una amenaza para los arrecifes de coral. Las inyecciones únicas provocan la muerte de las estrellas de mar en 24 horas, con síntomas de "piel descolorida y necrótica, ulceraciones, pérdida de turgencia corporal, acumulación de moco incoloro en muchas espinas, especialmente en la punta, y pérdida de espinas. Las ampollas en el tegumento dorsal atravesaron la superficie de la piel y dieron lugar a grandes llagas abiertas que expusieron los órganos internos". Esto se debió a la promoción del crecimiento de especies naturales de Vibrio a altas densidades, con el consiguiente desequilibrio simbiótico. ^[5]